微生物学基础，菌落总数计算方法及食品接种量解析微生物学基础教材

菌落总数计算技巧详解

菌落总数的计算是微生物学中一个基础且重要的步骤，其计算公式为：菌落总数（CFU/g或CFU/mL）= N × （1/d） × V，N代表计数板上的菌落数量；d为取样体积（mL）；V为稀释倍数,具体操作步骤如下：

取一定量的样品，例如1g液体或1mL液体，按照一定比例对样品进行稀释，例如稀释到10^-4或10^-5倍，以获得不同浓度的稀释液，将稀释液均匀涂布在培养基上，培养一段时刻后，计数平板上的菌落数量,即可根据上述公式计算出菌落总数。

若只有一个稀释度平板上的菌落数在适宜计数范围内，计算两个平板菌落数的平均值，再将平均值乘以相应稀释倍数，即可得到每g（mL）中菌落总数的结局，关键点在于，在进行菌落总数的测定时，应当取1毫升样本进行计数,以准确反映每毫升样本中的菌落总数。

菌落总数的计算公式还可以表示为：每克样品中的菌株数 = （平板上生长的平均菌落数 / 稀释液体积）稀释倍数，C代表某一特定稀释度下平板上的平均菌落数（200或300），V是涂布平板时所使用的稀释液体积，通常以毫升（mL）为单位，M是稀释倍数，如1：10表示样品被稀释了10倍。

食品接种量需根据具体加工类型确定，常用标准一般为原料重量的1%-5%,下面内容是对不同食品类型接种量的具体说明：

乳制品发酵：酸奶制作中乳酸菌接种量通常为2%-5%（即每100ml牛奶添加2-5ml菌种），奶酪生产需更高比例，如切达奶酪接种量达0.5%-5%，同时需保持32℃恒温环境。

发酵食品：以家庭常见的发酵食品为例，酸奶制作中，菌种接种量一般为牛奶体积的2%-3%，例如1升牛奶需加20-30ml市售酸奶或菌粉，若使用老酸奶作引子，需冷藏发酵8-12小时以保证菌群活性。

酱油酿造：酱油酿造使用的米曲霉接种比例控制在0.3%-0.5%,以平衡发酵速度与风味物质生成。

饲料添加：有效活菌数大于等于10亿个/克的芽孢菌，按全价饲料添加本品计算，如乳猪500-600克/吨，仔猪、生长猪、育肥猪300-400克/吨，种蛋禽300-500克/吨，肉禽200-400克/吨，反刍1000-2000克/吨，水产300-500克，饮水按200-500倍稀释自在饮水。

巨大芽孢杆菌的菌种接种量计算主要依据液体培养基的体积，对于液体培养基，接种量应该为总体积的1-5%，如果无论兄弟们准备使用100ml液体培养基进行培养，那么接种量应该在1-5ml之间。

初始接种量设定为8%，pH值为6，种龄为20小时，装量为30 mL（在250 mL的三角瓶中），实验在30℃的培养温度下进行，通过摇床以200 r/min的转速进行搅拌，发酵经过持续48小时，经过优化的培养条件后，芽孢形成率达到了95%，最终生物量为92×10^9 mL^-1。

研究者通过对比巨大芽孢杆菌与其他拮抗菌的芽孢形成率，确定了最佳的培养条件，培养基中碳源为1%的玉米粉，氮源为1%的大豆蛋白胨，无机盐包括0.1%的CaCl2·2H2O和0.05%的MnSO4，初始接种量设定为8%，培养基的pH值为6，种龄为20小时，装量为30 mL（使用250 mL的三角瓶）。

微生物接种量可以通过多种方式表示,常见的包括菌落形成单位和体积接种量。

菌落形成单位表示法：通过培养微生物后，统计形成的菌落数量来确定的，表示方式通常以体积百分比、质量百分比或细胞数量来表示。

体积接种量：以体积百分比表示，如1%、5%或10%等,接种量的大致会影响微生物在培养基中的生长速度和密度。

接种量在生物技术、发酵工程、制药、农业等领域具有重要意义，它直接影响培养或发酵经过的效率和产物的生成,合理确定微生物接种量对于保证实验结局的准确性和可靠性至关重要。